1、直接培养方法：标本可采用可疑患者的痰或咽试子，接种含血清或酵母膏的琼脂培养基，然后观察，结果一般直接报告阳性或阴性

2、血清学诊断：静脉血

患者血清与支原体脂质抗原结合试验，恢复期是急性期效价格的4倍以上

一般报告为1：40，1：80，1：160等，1：80以上有意义

3、血清抗体检测:需要静脉血，可以检查特异性IgM和IgG，特异性和灵敏度高

肺炎支原体感染后，可产生特异性IgM和IgG抗体

IgM类抗体出现较早，通常发生在感染后1周，3周～四周达到高峰，未来逐渐下降

肺炎支原体感染的潜伏期为2～3周后，当患者出现症状时，IgM抗体已达到相当高的水平，因此IgM抗体阳性可作为急性感染的诊断指标

如果IGM抗体阴性，肺炎支原体感染不能否认，需要检测IGG抗体

与IgM相比，IgG出现较晚，需要动态观察。如果感染显著增加，则表明感染处于后期

4、基因诊断:DNA探针对支原体的诊断敏感性稍差，但特异性高，用聚合酶链反应（PCR），敏感性和特异性都很高

目前，医院的应用较少